循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs）

CTC是各類(lèi)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的統(tǒng)稱(chēng)
CTC是分型與分析才具有重要臨床價(jià)值

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTCs，Circulating Tumor Cells）是痕量存在于外周血中的各類(lèi)腫瘤細(xì)胞的統(tǒng)稱(chēng)，因自發(fā)或診療操作從實(shí)體腫瘤病灶（原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶）脫落，大部分CTCs在進(jìn)入外周血后發(fā)生凋亡或被吞噬，少數(shù)能夠逃逸并錨著發(fā)展成為轉(zhuǎn)移灶【1】，增加腫瘤患者死亡風(fēng)險(xiǎn)。

大量研究表明，CTCs以不同形態(tài)存在于外周血中，既有單個(gè)存在（單細(xì)胞CTCs）、也有聚集成團(tuán)（CTM，Circulating TumorMicroemboli）【2】。腫瘤細(xì)胞在進(jìn)入外周血循環(huán)的過(guò)程中會(huì)發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變（EMT，EpithelIal Mesenchymal Transition），故CTCSs 存在不同細(xì)胞類(lèi)型，包括上皮細(xì)胞表型、間質(zhì)細(xì)胞表型和上皮細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞混合表型等【3】。其中，間質(zhì)細(xì)胞表型CTCs具有更強(qiáng)的轉(zhuǎn)移潛能【4】。

CTCs的臨床價(jià)值已被廣泛肯定，但CTC的分型與分析才具有重要臨床價(jià)值。

CTC分型檢測(cè)技術(shù)
納米技術(shù)與多重RNA原位分析技術(shù)的完美結(jié)合
對(duì)所有CTC進(jìn)行分離、分型、分析

CTC分型檢測(cè)技術(shù)有機(jī)結(jié)合了納米技術(shù)和多重RNA原位分析技術(shù)的優(yōu)勢(shì)，首次同步實(shí)現(xiàn)了各類(lèi)CTCs的分離、分型和分析，具有靈敏特異、全面精準(zhǔn)的特點(diǎn)【5】。CTC分型檢測(cè)技術(shù)不僅為腫瘤治療的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)提供了技術(shù)可能，還克服了臨床腫瘤個(gè)體化治療靶標(biāo)檢測(cè)普遍面臨的樣本局限，揭開(kāi)了實(shí)時(shí)腫瘤個(gè)體化治療新篇章。

在腫瘤確診后、手術(shù)前、手術(shù)后及每個(gè)治療周期的間歇期進(jìn)行CTC分型檢測(cè)，能夠全面、實(shí)時(shí)地反映CTCS數(shù)量及類(lèi)型的變化，可用于監(jiān)測(cè)腫瘤動(dòng)態(tài)、評(píng)估治療效果。通過(guò)進(jìn)一步分析CTC的基因信息，可以指導(dǎo)制定實(shí)時(shí)個(gè)體化治療策略。

CTC分離
不依賴(lài)特定生物標(biāo)志物的分離技術(shù)



CTC分型
多重RNA原位分析技術(shù)
精確分型并能深入開(kāi)展亞型分析
CTCs在形態(tài)學(xué)上可以分為單細(xì)胞CTC和細(xì)胞團(tuán)CTM，在細(xì)胞學(xué)上可以分為上皮型CTCs和間質(zhì)型CTCs。CTC分型檢測(cè)技術(shù)運(yùn)用多重RNA原位分析技術(shù)，檢測(cè)靈敏度和分型特異性分別在98%和99%以上，可以同步準(zhǔn)確識(shí)別以上全部類(lèi)型的CTCs【5】。


1、上皮細(xì)胞表型CTC；2、間質(zhì)細(xì)胞表型CTC；3、上皮細(xì)跑和間質(zhì)細(xì)胞混合表型CTC；4、上皮細(xì)胞表型CTM；5、間質(zhì)細(xì)胞表型CTM；6、上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞混合表型CTM;
7、白細(xì)胞;紅色熒光點(diǎn)∶上皮細(xì)胞標(biāo)記物;綠色熒光點(diǎn)∶間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物;藍(lán)色熒光點(diǎn)∶白細(xì)胞標(biāo)記物。
CTC分析


CTC分型檢測(cè)技術(shù)與一代技術(shù)對(duì)比
更全面、更精準(zhǔn)、更可靠
CTC分型檢測(cè)技術(shù)不但克服了一代技術(shù)只能分離獲得某一特定表型CTC的缺陷，實(shí)現(xiàn)了對(duì)所有CTCs的分離，同時(shí)還具備了對(duì)CTCs進(jìn)行全面分型和分析的能力。

CTC分型檢測(cè)的臨床應(yīng)用
監(jiān)測(cè)腫瘤狀態(tài)
評(píng)估治療效果
實(shí)時(shí)個(gè)體治療
CTC分型檢測(cè)適用所有實(shí)體腫瘤患者。僅需5m外周血，就能實(shí)現(xiàn)CTCs的分離和分型。CTC分型檢測(cè)能夠比影像學(xué)和血清學(xué)等現(xiàn)有常用檢測(cè)手段更早、更精確、更直接地反映腫瘤狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)真正的腫瘤實(shí)時(shí)個(gè)體化治療。




CTC的全基因組測(cè)序
CTC分型檢測(cè)分離獲得的循環(huán)腫瘤細(xì)胞，經(jīng)顯微切割回收后可用于全基因組測(cè)序。對(duì)單個(gè)細(xì)胞（或少數(shù)幾個(gè)細(xì)胞）的微量全基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，獲得高覆蓋率的完整的基因組后進(jìn)行高通量測(cè)序可用于揭示細(xì)胞群體差異和細(xì)胞進(jìn)化關(guān)系。多項(xiàng)研究表明，CTCs 的全基因組分析可以為療效評(píng)價(jià)、預(yù)后判斷以及個(gè)體化治療提供及時(shí)可靠的依據(jù)【6-7】
CTC的基因突變檢測(cè)
CTC分型檢測(cè)分離獲得的循環(huán)腫瘤細(xì)胞可用于基因突變檢測(cè)。大量臨床研究證實(shí)，利用CTCs進(jìn)行基因突變檢測(cè)的結(jié)果與腫瘤原發(fā)灶組織高度一致【8-10】，對(duì)腫瘤患者實(shí)時(shí)個(gè)體化治療具有重要價(jià)值。CTC分型檢測(cè)還可根據(jù)需要對(duì)獲取的CTC進(jìn)行單細(xì)胞基因分析。

CTC的FISH檢測(cè)
CTC分型檢測(cè)分離獲得的循環(huán)腫瘤細(xì)胞可用于FISH檢測(cè)。多項(xiàng)研究表明，以CTCs為樣本進(jìn)行FISH檢測(cè)的結(jié)果與腫瘤組織樣本檢測(cè)結(jié)果具有高度一致性【11,12】，HER2基因擴(kuò)增、ALK基因重排、EGFR基因擴(kuò)增、TOP2A基因擴(kuò)增等項(xiàng)目的FISH檢測(cè)能夠預(yù)測(cè)相應(yīng)藥物的療效【13,14】，為臨床治療方案的制定提供重要依據(jù)。

A、ALK基因重排陽(yáng)性肺癌CTC；B、ALK基因重排陰性肺癌CTC；C、EGFR基因擴(kuò)增陽(yáng)性肺癌CTC；

D、EGFR基因擴(kuò)增陰性肺癌CTC；E、HER2基因擴(kuò)增陽(yáng)性乳腺癌CTC；F、HER2基因擴(kuò)增陰性乳腺癌CTC；G、TOP2A基因擴(kuò)增陽(yáng)性乳腺癌CTC；H、 TOP2A基因擴(kuò)增陰性乳腺癌CTC；

CTC的培養(yǎng)與研究
CTC分型檢測(cè)分離獲得的循環(huán)腫瘤細(xì)胞可用于細(xì)胞培養(yǎng)，可供進(jìn)一步的腫瘤基礎(chǔ)研究，如耐藥機(jī)制分析、腫瘤新藥開(kāi)發(fā)、腫瘤轉(zhuǎn)移/復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型建立等。

乳腺癌CTCs培養(yǎng)，在20X鏡下進(jìn)行觀察。A明場(chǎng)；B.合成圖；C.DAPI；D.EpCAM-PE。
CTC分型檢測(cè)分離獲得的循環(huán)腫瘤細(xì)胞可用于干細(xì)胞檢測(cè)。腫瘤干細(xì)胞（CSC，Cancer StemCell）是腫瘤復(fù)發(fā)和形成轉(zhuǎn)移灶的根源，已有大量研究表明在乳腺癌、肺癌、肝癌等癌種中存在具有干細(xì)胞特征的CTCs【15，16】。另有研究顯示具有CSC特征的CTCs與腫瘤患者治療的耐藥性【17】、術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)【18】及生存期【19】存在顯著關(guān)聯(lián)。

A-C∶有腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記的肺癌CTC;D∶同時(shí)具有干細(xì)胞標(biāo)記和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記的肺癌CTC。藍(lán)色;DAPl;亮藍(lán)色熒光點(diǎn)∶腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物;綠色熒光點(diǎn)∶間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物

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